一 仪器设备介绍

1， 仪器特点：本平台现有机型为Bio-rad CHEF-DRIII，包括主机（Power Module）、电泳槽（Electrophoresis Chamber）、泵（Pump）、冷凝机（Cooling Module），可提供90-120°的电场角度，对100bp-10mb片段的DNA进行分离。

2， 主要用途：脉冲场凝胶电泳可用于癌症、食品安全、公共健康、质量控制和基因组绘图等研究。美国疾病控制预防中心（CDC）的食品安全监管实验室用此方法进行菌株分型的流行病学研究，建成通用网络系统（Pulsenet）。

3，开放时间：周一至周五上午9：00-下午5：00开放 （节假日，寒暑假停止对外服务）。

4，收费标准：由使用者自行准备试剂进行试验，平台负责人提供基本操作规章培训，仪器维护费与电费暂时按照院外20元/小时，院内15元/小时收费，或按照具体工作量协商。

5，设备放置地点：中国农业大学西校区动医动科大楼210研究生公共平台实验室。

二 使用须知

1，预约：仪器使用必须提前1-2周预约，无预约恕不接待，具体实验时间由平台与预约人商定。预约成功后，请准时按照预约时间上机检测样品。若取消预约请至少提前三天通知，以便提高仪器的使用效率。如果预约后无故不进行实验，我们将视情况停止对该实验者及所在实验室的预约服务。预约时请说明：姓名，联系方式，预约日期，样品数目。

2，实验注意事项：

a． 电源设备（Power Module）可提供的最小电压是0.6V/cm或20V，最大电压是9V/cm或300V。

b． 如果转换电极时间（swith times）低于1秒，或使用高于9V/cm电压，电极将很快损坏。

c． 电泳槽前方有两个端口供缓冲液流出，左边的用于电泳液在仪器中循环，右边的用于电泳液排出。电泳开始和结束前，均要用2.2L蒸馏水注入电泳槽中，循环洗涤电泳槽、冷凝机和泵，以免盐离子结晶于设备中。

d． 电源开启后，电流将从电泳槽后方的安全连锁装置（safety interlock）中通过，若未安装好，电流和电压都会中断，随之，电泳也会结束。

e． 整个电泳装置严禁溴化乙锭（EB）污染。

3，样品上机要求：

样品上机前，需经包埋——消化裂解——DNA切割——制胶后，方可进行电泳。

4，结果分析：

电泳结束后，可以用溴化乙锭（EB，1μg/ml）浸泡染色，获取图像保存为TIFF格式。Bio-rad推荐用FPQuestTM，或者InofQuestTMFP这两款软件对图像进行分析。

三 脉冲场凝胶电泳仪操作规程

1，设备简介：

该电泳仪为Bio-rad公司产品，型号是CHEF-DRIII，包括主机、电泳槽、冷凝机、泵和其他附件。

2、设备操作流程：

a．确保电泳槽是水平的。

b．加入2.2L电泳缓冲液，关上盖子。

c．打开主机和泵的开关，建议泵设在70（在此条件下，缓冲液的流速约为0.75L/分钟）。确保缓冲液在管道中正常循环。

d．打开冷凝机，设定温度。

e．取出凝固好的胶，用吸水纸清楚胶四周和底面多余的胶，把胶放入电泳槽，关上盖子。

f．设置电泳参数，开始电泳。

g．结束电泳，关机顺序为：冷凝机——泵——主机。

注意事项：

a. 预约申请: 提前两周在工作日时间内预约实验，请提前一天预约实验具体时间，预约电话：010-62734377。

b. 由于一天内有多个人预约，请预约者务必准时上机，未能在预约时间开始前将样品准备好上机，将按照预约时间进行计时收费。

c. 取消预约：请于预约时间前3天取消预约，否则记一次违约。 同一个使用者若违约累计3次，则暂停使用此服务三个月。

负责人：王晓佳

联系电话：010-62734377 邮箱 wangxj@cau.edu.cn

中国农业大学动物医学院研究生210公共平台实验室

2012年12月26日