动物医学院研究生公共实验室流式细胞仪对外开放使用说明
一 仪器设备介绍
1，仪器特点本：本平台现有机型为BD FACSCalibur和BD FACSAria III两台设备，具有检测分析功能及分选功能。FACSCalibur 为双激光四波长，测量参数为 FS、SS、FL1、FL2、FL3、FL4。可检测4色荧光，主要用于各种样品的分析，无分选功能。FACSAria III为双激光七色，主要用于各种细胞的无菌分选(分选的使用,请参照三,分选使用规程)。
2，主要用途：细胞增值，细胞周期，细胞表面及细胞内标记物质检测，淋巴细胞分型，细胞分选等。
3，开放时间：工作日周一至周五上午9：00-下午5：00开放。（节假日，寒暑假停止对外服务）。
4，收费标准：分析检测服务：校外每管40元，校内每管30元，本院实验室每管20元（注：本校实验室与校外合作的课题，按照校外标准收费）。细胞分选服务的收费由平台和实验者按照工作量协商。
5，设备放置地点：中国农业大学西校区动医动科大楼217A 研究生公共平台实验室。
二 使用须知
1，预约：仪器使用必须提前预约，无预约恕不接待，实验者请在工作时间内提前一周预约（分选实验需要提前两周预约），具体实验时间由平台与预约人商定。预约成功后，请准时按照预约时间上机检测样品。若取消预约请至少提前三天通知，以便提高仪器的使用效率。如果预约后无故不进行实验，我们将视情况停止对该实验者及所在实验室的预约服务。
预约时请说明：姓名，联系方式，预约日期，样品荧光参数，检测指标，样品数目（如果对检测的样品的荧光参数不了解，请先携带试剂说明书以及相关文献资料与我们平台技术老师讨论，以确保我们的设备能够为您提供服务）。预约电话：010-62734483。
2，实验注意事项：
a，由于流式细胞术属于灵敏性较高的实验检测手段，样本准备过程中的微小误差，极有可能造成实验结果的不可重复性，因此，需要实验者严格按照实验要求和步骤进行，必要时需先摸索相关实验条件，建立适合自己的实验操作体系后再进行正式实验。
b，如果您是第一次做相关实验，由于流式细胞术涉及的试剂和耗材以及实验样品都比较昂贵，为了节省您的时间和减少经济损失，我们建议首次使用请至少提前两周与本平台技术老师预约讨论实验的实施方案，先做预实验，再做正式实验。
c，对照设置：流式细胞术的结果分析主要以对照为参考值，因此对照的好坏，是否齐全，决定了整个实验过程的成败和实验结果的可信度。如果对对照样本的设定有疑问请咨询公共实验室，电话62734483，vetwyq@cau.edu.cn.我们共同讨论。
3，样品上机要求：
a，供流式分析的样品是单细胞悬浮液，样品浓度调至1-10 X 106 cells/ml，浓度过高或过低都会对检测结果造成一定的影响，一般实验只需0.2-0.5 ml的样品即可。
b， 细胞样品务必放至BD FALCON 352052 试管中（本学院实验室请自行准备上样管），否则无法上机。
c， 上机前务必去除样品中的细胞团块，防止管路堵塞，样品必需预先使用附滤网BD FALCON试管 (Cat. No.352235) 或35-55 mm的尼龙筛网将细胞过滤。若未过滤样品即上机而引起机器堵塞及损坏，需负赔偿责任。
4，结果分析：
检测结果是否符合实验者预期不在我们服务范围内，我们只对所检测样本的实验结果负责，保证实验结果真实可信。实验结果可由实验者自行拷贝分析，也可由公共实验室协助分析，分析只使用BD CellQuest分析软件分析，结果分析以对照为依据，不以实验者假设或预期为依据，请理解！
三 流式细胞分选操作规程
1,设备简介
该流式细胞仪为美国BD公司的BD FACSAriaIII，配有两种激光光源，波长分别为488nm、633nm，可检测七种荧光。
2、分选准备
使用者可根据需要使用各种不同的实验流程，如抗体荧光标的标定(antibody labeling)或荧光基因转染(transfection)。上机前必须完成下列程序：
a. 样品必需预先使用附滤网BD FALCON试管 (Cat. No.352235) 或35-55 mm的尼龙筛网将细胞过滤。若未过滤样品即上机而引起机器堵塞及损坏，需负赔偿责任。细胞浓度应保证在1-2x107个/ml。
b. 如细胞分选后需再次培养（无菌分选），请准备含合适培养液的收集管，分选前交操作员。建议15ml的离心管中加入6ml含有抗生素的培养基，或在5 ml离心管中加入 2ml的培养基当细胞分选时的垫底液。
c. 若欲分选GFP、DsRed等单色基因转染的样品，需提供未经转染的相同细胞为控制组标本，以作为分选前机器校正用。若以多种荧光染色进行分选，需提供各种单一荧光染色的标本作为分选前仪器校正用。
e. 本服务项目以无菌分选为主，希望保证所提供样品的无菌性，不接受感染性样本的检测和分析。
注意事项：
a. 预约申请: 提前两周在工作日时间内预约实验，请提前一天预约实验具体时间，预约电话：010-62734483。
b. 由于一天内有多个人预约分选，为避免激光器空开并防止影响到下一个使用者的权益，请预约者务必准时上机，未能在预约时间开始前将样品准备好上机，将按照预约时间进行计时收费。
c. 取消预约：请于预约时间前3天取消预约，否则记一次违约。 同一个使用者若违约累计3次，则暂停使用流式细胞服务三个月。
d. 为了提高分选效率及节省费用，建议分选前先使用FACS Calibur, FACS Canto或其他流式细胞仪确认细胞阳性细胞的荧光比例。
负责人：王永强
联系电话：010-62734483 邮箱 vetwyq@cau.edu.cn
中国农业大学动物医学院研究生公共实验室流式细胞仪工作室
2012年11月26日
